數字PCR可以直接計算目標序列的拷貝數,因此無(wú)需依賴(lài)于對照樣品和標準曲線(xiàn)就可以進(jìn)行精確的絕對定量檢測;此外,由于數字PCR在進(jìn)行結果判讀時(shí)僅判斷有/無(wú)兩種擴增狀態(tài),因此也不需要檢測熒光信號與設定閾值線(xiàn)的交點(diǎn),完全不依賴(lài)于Ct值的鑒定,因此數字PCR的反應受擴增效率的影響大大降低,對PCR反應抑制物的耐受能力大大提高;數字PCR實(shí)驗中標準反應體系分配的過(guò)程可以極大程度上降低與目標序列有競爭性作用的背景序列濃度,因此數字PCR技術(shù)也特別適合在復雜背景中檢測稀有突變。
微滴式數字PCR(Droplet Digital PCR, DDPCR)是第三代 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈式反應)技術(shù),是一種對核酸分子進(jìn)行絕對定量的方法。
DDPCR的原理是在PCR擴增前對樣品進(jìn)行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬(wàn)個(gè)納升級的微滴,其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個(gè)至數個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后,逐個(gè)對每個(gè)微滴進(jìn)行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒(méi)有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。
在ddPCR中的微液滴產(chǎn)生中,ddPCR-DG7500油相可以直接和PCR擴增試劑(包含待測的DNA樣品)注入到液滴合成芯片中,產(chǎn)生所需要尺寸的乳液滴微球。隨后,將獲得的乳液滴微球進(jìn)行PCR擴增。
ddPCR-DG7500油相是一種包含PFPE-PEG混合結構的HFE7500油相溶液,可以直接用于ddPCR中的乳液微球產(chǎn)生,無(wú)需再進(jìn)行二次處理。該油相可以幫助用戶(hù)節省實(shí)驗時(shí)間,獲得良好的實(shí)驗結果,同時(shí)把精力用于目標產(chǎn)物上,不用擔心因油相質(zhì)量不穩定而產(chǎn)生的不良目標產(chǎn)物。
ddPCR-DG7500油相試劑是一種液體狀態(tài),提供1mL包裝和2mL包裝的兩種規格。
名稱(chēng):數字PCR油相7500試劑
型號:ddPCR-DG7500
規格:液體狀態(tài),4℃環(huán)境保存,體積:1mL,EP管包裝,即開(kāi)即用。